Применение фонофореза и ранозаживляющей повязки на основе коллаген-хитозанового комплекса «Коллахит-ФА» при лечении поверхностных ран у кроликов
В современной ветеринарной практике сохраняется острая потребность в создании высокоэффективных перевязочных средств, обеспечивающих ускоренную тканевую регенерацию, профилактику инфекционных осложнений и снижение риска развития неблагоприятных последствий при лечении раневых процессов. Особый интерес в данном контексте представляет изучение терапевтических свойств раневой повязки «Коллахит-ФА» в отношении поверхностных повреждений у кроликов.
Поверхностные раневые поражения занимают лидирующее положение в структуре травматических повреждений у животных. Отсутствие своевременной и адекватной терапии нередко приводит к развитию осложнений, требующих хирургического вмешательства и длительного дерматологического лечения. Несмотря на широкий ассортимент современных перевязочных материалов, сохраняется актуальность разработки средств, обладающих оптимальным сочетанием биологической совместимости, антимикробной активности и стимулирующего воздействия на репаративные процессы.
Особенностью повязки «Коллахит-ФА» является ее композитный состав, включающий коллаген и хитозан, что обеспечивает комплексное терапевтическое действие. Материал демонстрирует выраженные гемостатические свойства, антибактериальную активность и способность поддерживать оптимальный уровень влажности в раневом ложе, создавая благоприятные условия для регенерации. Однако если в клинической медицине механизмы действия данного материала изучены достаточно подробно, то в ветеринарной практике, особенно в отношении кроликов, экспериментальных данных недостаточно.
Проведение настоящего исследования обусловлено необходимостью научного обоснования применения повязки «Коллахит-ФА» в ветеринарии. Полученные результаты позволят усовершенствовать методы раневой терапии, сократить сроки восстановительного периода и улучшить качество оказания помощи травмированным животным.
Цель исследования — оценка эффективности комбинации применения ранозаживляющей повязки на основе коллаген-хитозанового комплекса «Коллахит-ФА» и фонофореза при лечении ран у кроликов.
Материалы и методы исследования
Работа выполнена на базе стационара для содержания животных, в клинике «Вита» и гистологической лаборатории Красноярского государственного аграрного университета в 2024 году.
Обращение с животными проходило в соответствии с Рекомендацией Коллегии ЕЭК от 14.11.2023 № 33, что подчеркивает соблюдение этических стандартов в экспериментальной биологии.
Для эксперимента были выбраны самки кроликов-гибридов по принципу аналогов массой 2,0–2,5 кг.
Кролики трех групп содержались в одинаковых условиях стационара в оборудованных двухъярусных клетках при температурном режиме от +12 до +18 °C и естественном освещении с 6:00 до 21:00 (в весенний период).
Животные получали комбинированное питание (зерно, сено, сочные корма, овощи) два раза в сутки.
Процедура нанесения раны была стандартизирована — использование трафарета 5,0 х 5,0 см и стерильного инструментария, что позволяет минимизировать вариабельность в эксперименте и обеспечить идентичность условий для всех подопытных животных. Анестезия была проведена с учетом этических норм раствором для инъекций «Новокаин» 0,5% (ООО НПП «Агрофарм», Россия).
Для гистологического исследования образцы тканей отбирали в ходе санации раневой поверхности при смене повязок на 8-е, 15-е и 21-е сутки эксперимента у всех животных в группе. Биоптаты получали из краевой зоны раневой поверхности, включая прилегающие неизмененные ткани, стандартизированным методом.
Образцы тканей погружали в 10%-ный забуференный нейтральный формалин («ХимРеактив», г. Екатеринбург, Россия) на 3 суток. На 4-е сутки промывали в проточной воде в течение двух часов, помещали в изопропиловые спирты с последующей проводкой по парафинам, заключали образцы в парафиновые блоки на специализированную кассету («БиоВитрум», Россия). Гистологические срезы толщиной 6 мкм изготавливали на микротоме. Окрашивали гематоксилином и эозином и по Ван Гизону («БиоВитрум», Россия). Полученные препараты просматривали в микроскопе «Ломо» (Россия) под увеличением х10, х40, х90 и производили фотосьемку видеоокуляром «Микромед Эврика» («Микромед», Россия).
После нанесения раны самки кроликов-гибридов были разделены на две группы по пять особей. В первой (контрольной) группе для лечения применяли ранозаживляющее покрытие на основе коллаген-хитозанового комплекса «Коллахит-ФА» («Коллахит» ООО, Россия). Раневая повязка содержит коллаген и хитозан, обладает рядом уникальных свойств, включающих гомеостатический эффект и антибактериальный, и способствует поддержанию влажной среды в раневом поле, что благоприятно влияет на процессы заживления. В результате рана становится сухой и чистой, что позволяет производить перевязки легко и безболезненно.
Во второй (опытной) группе к этому же покрытию добавляли ультразвуковую стимуляцию с использованием аппарата «Ретон-АУТн-01» (НПО «Ретон», Россия). Действие прибора основано на использовании низкочастотных ультразвуковых волн, которые проникают в глубокие слои тканей. При комбинации с раневой повязкой наблюдается эффект ультразвукового фонофореза, способствующего трансдермальному транспорту лекарственных веществ из повязки в нижележащие ткани. Стимуляцию ультразвуком проводили в течение 1 мин. в сутки при смене раневого покрытия. Раневую повязку меняли каждые 3 суток.
Методология исследования включала морфометрические, макроскопические и гистологические методы.
Для морфометрических исследований измеряли площадь раны у всех особей в обеих группах в течение 28 суток (до полного заживления раневой поверхности), перенося ее контуры на плотную полиэтиленовую пленку, что позволило количественно оценить степень заживления. Пленки с контурами ран подвергали оцифровке и подсчету площади при помощи программы Aitami studio (ООО «Альтами», Россия). Для достоверности измерения проводили калибровку каждого оцифрованного изображения относительно стандартной линейки.
Полученные морфометрические данные анализировали с использованием программы Excel (США), а для оценки достоверности использовали T-критерий Стьюдента (р < 0,05).
Результаты и обсуждение
В 1-е сутки после нанесения поверхностных ран на кожный покров кроликов наблюдали гиперемию и экссудативные выделения. Общее состояние животных оставалось в пределах физиологической нормы. К 4-м суткам в обеих группах отмечали отечность тканей, гиперемию, а раневое пространство было покрыто бледно-желтым экссудатом.
На 8-е сутки у животных контрольной группы наблюдали признаки активного воспалительного процесса: сохраняющуюся влажность раневых поверхностей, интенсивно-красный цвет, частично сформированный струп и выраженную болевую реакцию при пальпации. Эти признаки указывают на замедленное течение репаративных процессов. В отличие от них, у животных опытной группы клиническая картина была более благоприятной: отмечалось формирование обильного струпа, что свидетельствует о переходе воспалительной фазы в фазу пролиферации и начале активной эпителизации. Отсутствие болевой реакции при пальпации подтверждало снижение воспалительной активности.
На микроскопическом уровне на 8-е сутки наблюдали различные процессы восстановления. В контрольной группе гистологическая картина была неоднородной: грануляционная ткань, состоящая из бластных мезенхимальных клеток, таких как фибробласты и зачатки кровеносных сосудов, что свидетельствует о начале регенерации, отмечаются обширные участки фиброзно-некротических масс и выраженная лейкоцитарная инфильтрация (рис. 1), что подтверждает данные клинического наблюдения о персистенции острой воспалительной реакции и объясняет замедленное течение заживления.
В опытной группе наблюдали признаки более активного и организованного процесса регенерации. Отмечали четкие зачатки слоев эпителиальных клеток по краям раны. Раневое пространство было покрыто струпом, состоящим из некротизированных клеток и фибрина, который выполнял защитную функцию. Под струпом отмечали развитую грануляционную ткань с многочисленными фибробластами, что указывает на активное течение пролиферативной фазы (рис. 2).
На 15-е сутки установлены существенные различия в характере репаративных.
У животных контрольной группы сохранены признаки хронического воспаления и замедленного течения заживления: частичное покрытие раны струпом с наличием под ним серозно-гнойного экссудата, болезненность при пальпации. В опытной группе зарегистрировано активное заживление: раневое пространство заполнено мелкозернистыми розовыми грануляциями, что указывает на активное формирование зрелой соединительной ткани. Наблюдается краевая эпителизация. Эти признаки свидетельствуют о завершении воспалительной фазы и переходе к заключительному этапу заживления — реконструкции тканей.
Микроструктурные изменения, наблюдаемые на 15-е сутки в контрольной группе, отмечали: формирование молодого эпителия, сосуды в сосочковом слое, единичные фибробласты, что говорит о формировании соединительной ткани, зачатки коллагеновых волокон (это говорит о начале процесса формирования внеклеточного матрикса) (рис. 3).
В опытной группе эпителиальный слой активно пролиферирует в грануляционную ткань, которая начинает приобретать более плотную структуру, схожую с волокнистой соединительной тканью. Вертикальные сосудистые структуры не наблюдались, коллагеновые волокна плотные, формируют выросты в грануляционной ткани, что говорит об активной пролиферации клеток (рис. 4).
На 21-е сутки в контрольной группе раневые поверхности сохранили неровные очертания, заполнены грануляционной тканью, при этом продолжается процесс краевой эпителизации. Такие характеристики свидетельствуют о неполной реконструкции кожного покрова и указывают на замедленное течение завершающей фазы заживления — ремоделирования тканей. Наличие неровных краев и незрелых грануляций может указывать на формирование нестабильного эпителия, подверженного риску повторного травмирования и осложнений, особенно при воздействии внешних факторов.
В опытной группе — полное завершение эпителизации, что указывает на полноценное восстановление структур кожного покрова. Наличие роста шерстного покрова в области экспериментальной раны является маркером восстановления функции кожи и окончательного завершения репаративного процесса.
Микроструктурные изменения в контрольной и опытной группах на 21-е сутки указывают на значительные различия в состоянии эпителиального слоя кожи и сопутствующих структур.
В контрольной группе наблюдаются признаки незрелости эпителия: неровная базальная мембрана, продолжающееся формирование грануляционной ткани, единичные зачатки придатков (рис. 5).
В опытной группе эпителий полностью сформирован и представлен зрелыми клетками. Наличие плотных и упорядоченных пучков коллагеновых волокон, волосяных фолликулов и сальных желез указывает на завершение ремоделирования и восстановление функциональной структуры кожи (рис. 6).
Морфометрические данные по эксперименту были сведены в таблицу, сформированы в гистограмму и демонстрируют динамику сокращения площади раны (рис. 7).
Выводы
В результате исследования установлено, что комбинированное применение раневого покрытия «Коллахит-ФА» и низкочастотной ультразвуковой стимуляции обеспечивает выраженный положительный эффект в лечении поверхностных ран у кроликов. Статистический анализ морфометрических данных выявил достоверное (p < 0,05) ускорение репаративных процессов: к 28-м суткам эксперимента в опытной группе достигнуто 83,8% сокращения площади раневой поверхности, что на 8,8% превышает показатели контрольной группы.
Клинические наблюдения продемонстрировали различия в динамике заживления. В опытной группе отмечено сокращение воспалительной фазы к 8-м суткам с последующим активным переходом к пролиферации и ремоделированию тканей, в то время как в контрольной группе сохранялись признаки персистирующего воспаления до 15-х суток эксперимента.
Гистологический анализ подтвердил формирование полноценного регенерата в опытной группе, характеризующегося организованной структурой грануляционной ткани с интенсивным ангиогенезом, активным фиброгенезом с образованием ориентированных пучков коллагеновых волокон, полной эпителизацией с восстановлением базальной мембраны и дифференцировкой придатков кожи к 21-м суткам.
Особую значимость представляет восстановление функциональных структур кожи — формирование волосяных фолликулов и сальных желез, что свидетельствует о полноценной регенерации, а не просто рубцевании раневого дефекта. Комплексное действие методики обеспечивается сочетанием свойств коллаген-хитозанового комплекса, создающего оптимальные условия для репарации, и физического воздействия ультразвука, потенцирующего клеточную активность и транспорт биологически активных веществ.
Полученные результаты позволяют рекомендовать комбинированную методику с применением покрытия «Коллахит-ФА» и ультразвуковой стимуляции для широкого использования в ветеринарной практике при лечении ран различной этиологии. Перспективные направления дальнейших исследований — изучение молекулярных механизмов взаимодействия компонентов терапии и адаптация методики для других видов сельскохозяйственных и домашних животных.
Об авторе
Никита Анатольевич Чуев, аспирант
https://orcid.org/0009-0003-8237-3360 ivachka.2016@mail.ru
Красноярский государственный аграрный университет, пр. Мира, 90, Красноярск, 60049, Россия
УДК 619:615.849.19
DOI: 10.32634/0869-8155-2025-399-10-25-31
Просмотров: 107
