Клинико-офтальмологическая характеристика регенерации роговицы при хирургическом лечении с помощью амниотической мембраны у собак
Язва роговицы — локальный дефект поверхности роговицы, который сопровождается процессом воспаления подлежащей стромы, способен осложняться проникновением и развитием бактериального компонента, вирусного и грибкового агентов. Одним из опасных осложнений, приводящих к необходимости энуклеации глаза, является перфорация роговицы.
На сегодняшний день возможности медикаментозного лечения глубоких язвенных поражений роговицы не позволяют добиться полноценной регенерации язвенного дефекта, в результате чего хирургические методы лечения остаются основными методами выбора.
Несмотря на активную работу в области повышения эффективности результатов реконструктивно-восстановительных операций на роговице и множество предложенных способов хирургического лечения при язвенных процессах, возможности хирургических методов могут быть ограниченны в силу ряда причин. Среди них сложность получения материала для замещения роговицы от донора и процессы избыточного рубцевания в зоне язвенного дефекта после проведения операции.
В последнее время в медицинской и ветеринарной практике отмечается рост интереса к использованию амниона как биоматериала для замещения язвенных дефектов роговицы у различных видов животных в связи с научным обоснованием ряда положительных свойств данного биоматериала. Амниотическая мембрана, окружая эмбрион, ограничивает амниотическую полость и является оболочкой, распложенной на внутренней стороне плаценты. После появления публикаций, описывающих полезные свойства амниотической мембраны (в частности, невысокие показатели иммуногенности, стойкие эпителиально-стромальные контакты, способность профилактировать процессы апоптоза поверхностного эпителия роговицы, барьерную функцию, снижающую проникновение лимфоцитов, а также свойства тормозить иммунологический конфликт тканей в месте язвенного дефекта и, что является наиболее важным, сохранять высокий уровень прозрачности роговичной ткани в месте проведения протезирования), стал отмечаться интерес к возможности ее применения в качестве биоматериала.
Несмотря на имеющиеся исследования о возможности применения амниотической мембраны в медицинской практике, отмечается недостаточное количество данных в ветеринарной отечественной литературе.
В связи с этим целью исследования являлось изучение возможности использования и снижения образования выраженных рубцовых изменений в области проведения реконструктивно-восстановительных операций по поводу глубоких язв роговицы с помощью амниотической мембраны.
Материалы и методы исследования
В исследовании принимали участие собаки различных пород в количестве 26 особей, все животные были представлены с целью проведения профильного офтальмологического осмотра при помощи специальных инструментальных методов. Работа выполнена на основании анализа историй болезни животных, обследованных в условиях клиники кафедры болезней мелких домашних, лабораторных и экзотических животных ФГБОУ ВО «Российский биотехнологический университет (РОСБИОТЕХ)», а также частной клиники «Инновет» г. Москвы за 9-месячный период в 2024‒2025 гг.
Проанализированы данные о возрасте, породной и половой принадлежности животных, этиологии язвенных дефектов, а также результаты офтальмологического осмотра — клинические проявления, характер течения и осложнения язвенных кератитов исследуемой группы животных.
Для проведения офтальмологического и клинического осмотра использовали щелевую лампу Shin Nippon (SHIN-NIPPON, Япония) и флюоресцеиновую инстилляционную пробу (флюоресцеиновый тест), позволяющую определить наличие, локализацию и размер язвенного дефекта вследствие окрашивания диагностическим красителем флюоресцеином натрия стромы роговицы.
В ходе проведения протезирования глубоких язв роговицы амниотической мембраной применяли хирургический микроскоп с системой X-Y (Carl Zeiss, Германия), микрохирургические офтальмологические инструменты. Трансплантат получали с помощью трепана по размеру, соответствующему язвенному дефекту, амниотическую мембрану фиксировали эпителиальной стороной вверх прерывистыми швами при помощи шовного материала на основе полигликолида USP 8/0 после механической обработки язвенного дефекта.
До и после хирургического этапа пациенты получали терапию в виде инстилляции глазных капель с содержанием офлоксацина («Флоксал», Dr. Gerhard Mann, Bausch Health, Германия) и лубриканта («Корнерегель», Dr. Gerhard Mann, Bausch Health, Германия), кратность применения которых рассчитывалась индивидуально в каждом клиническом случае.
Эффективность проведенного хирургического лечения оценивали на основании прозрачности язвенного дефекта роговицы (лейкомы), наличия зрения животного, степени помутнения роговицы на прилегающей к язвенному дефекту, а также наличия васкуляризации и пигмента. При помощи цифровой офтальмологической камеры Optomed Smartscope (Optomed, Финляндия) регистрировали процессы регенерации в зоне язвенных дефектов.
Для оценки интеграции амниотической мембраны в строму роговицы проводили гистологическое исследование энуклеированного глазного яблока собаки посмертно, в результате гибели через 7 месяцев после проведения кератопластики. Полученный материал фиксировали в 10%-м нейтральном забуференном формалине в соотношении 1:10 с одной заменой раствора. Патоморфологическое исследование выполнено в центре ветеринарной патоморфологии «CITO» (Красногорск, Россия).
Гистологические препараты глазного яблока окрашивали гематоксилин эозином протоколам фирмы-производителя и подвергали патоморфологическому исследованию с целью выявления изменений роговицы в месте проведения кератопластики при помощи амниотической мембраны.
Исследования проводили в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза от 22 сентября 2010 года о защите животных, используемых в научных целях.
Анализ и математическую обработку полученных результатов проводили с помощью программы Microsoft Excel (США).
Результаты и обсуждение
Средний возраст исследуемых животных составлял 5,1 ± 3,3 лет. Анализ полового диморфизма позволил установить следующее процентное взаимодействие: язвы роговицы диагностировали у самок в 57,7% случаев (15 собак), у самцов — в 42,3% случаев (11 собак).
В 80,77% случаев собаки были породистыми (21 собака), из них 34,62% собак (9 особей) относились к брахицефалическим породам (мопс, чихуахуа, брабансон, пекинес), что является фактором риска в силу особенностей морфологии черепа и орбиты, усложняет течение патологического процесса и регенерацию язвенного дефекта. В 19,23% случаев собаки не имели четкой породной предрасположенности (5 особей).
Во всех случаях выявляли унилатеральное расположение язвенного дефекта: в 53,85% случаев отмечали повреждение правого глаза (14 собак), в 46,15% случаев — левого (12 собак). Основными клиническими признаками являлись роговичный синдром, проявляющийся фотофобией, слезотечением и блефароспазмом, отмечались также инъекция сосудов глазного яблока, отек роговицы, наличие видимого дефекта, васкуляризация при длительном течении процесса. В 84,62% случаев диагностировали сопутствующий рефлекторный увеит, проявляющийся миозом, опалесценцией влаги передней камеры глаза и изменениями радужной оболочки. У 21 собаки (80,77%) проводили измерение внутриглазного давления глаза с язвенным дефектом, у 5 собак (19,23%) измерения не проводили ввиду высокого риска перфорации. В 65,38% случаев (17 собак) наблюдали снижение внутриглазного давления пораженного глаза; среднее значение внутриглазного давления глаз с язвенным дефектом и здорового составляло 10,08 + 2,11 мм рт. ст. и 15,38 + 2,45 мм рт. ст. соответственно. В 19,05% случаев (4 собаки) внутриглазное давление оставалось в пределах нормы, клинически значимая разница с показателями здорового глаза отсутствовала.
При проведении исследования в 34,62% случаев (9 собак) была установлена этиология повреждения роговицы. В 11,54% случаев (3 собаки) язвы роговицы были травматические, из них 1 случай (3,85%) — травма кошачьим когтем. Также в ходе обследования животных с язвенными дефектами регистрировали энтропион нижних век (11,54%, 3 собаки), трихиаз
(3,85%, 1 собака), дистрихиаз (3,85%, 1 собака), новообразование мейбомиевой железы верхнего века (3,85%, 1 собака).
В результате офтальмологического обследования в 50,0% случаев диагностировали поверхностные язвы роговицы с потерей стромы менее ½, в 15,38% случаев глубина язвенного дефекта составляла около 20%, в 11,54% случаев — около 30%, в 23,08% — около 40%. В 38,46% случаев регистрировали глубокие стромальные язвы роговицы с потерей ½ толщины роговицы и более, в 7,69% — десцеметоцеле, в 3,85% случаев наблюдали язву, осложненную перфорацией (табл. 1, рис. 1). У одной собаки (3,85% случаев) язва роговицы была осложнена кератомоляцией.
При оценке локализации установили, что в 53,85% случаев (14 собак) язва роговицы располагалась центрально (рис. 2), в 15,38% случаев (4 собаки) — парацентрально (рис. 3), в 11,54% случаев (3 собаки) — в нижнем латеральном квадранте, в 7,69% случаев (2 собаки) — в верхнем квадранте, в 7,69% случаев (2 собаки) — в латеральном квадранте и в 3,85% случаев (1 собака) — в нижнем (рис. 4).
При исследовании диаметр язвенного дефекта в большинстве случаев составлял 4 мм (46,15%, 12 собак), в 34,62% случаев (9 собак) — 5 мм, в 19,23% случаев (5 собак) — 3 мм.
С учетом комплексного подхода при лечении животных с диагнозом «язва роговицы» проведен анализ применения каждого метода, выраженный в процентном соотношении. В 88,46% случаев применяли терапевтическое лечение, в 11,54% случаев лечение проводили при помощи реконструктивно восстановительных операций с применением амниотической мембраны (рис. 5).
Амниотическая мембрана использовалась в качестве биоматериала при хирургическом лечении десцеметоцеле и глубоких стромальных язвах роговицы с потерей стромы более 50% с целью восполнения дефекта и снижения риска перфорации глазного яблока в качестве механического протектора, способствующего ускорению эпителизации за счет улучшения миграции эпителиальных клеток, а также как трансплантат, не вызывающий иммунную реакцию, предотвращающий апоптоз эпителиальных клеток, обладающий противомикробным, антифиброзным, антиангиогенным и противовоспалительным свойствами.
Также в 15,38% случаев проводилось хирургическое вмешательство, необходимое для устранения этиологического фактора: в 11,54% случаев выполнили блефаропластику нижнего века по Хот-Цельсу в различных модификациях, в 3,85% случаев — клиновидную резекцию новообразования мейбомиевой железы верхнего века.
Результатом хирургического лечения глубоких язв роговицы с использованием амниотической мембраны в качестве биоматериала являлась регенерация с полной эпителизацией язвенного дефекта роговицы с сохранением слабовыраженного помутнения в зоне проведения хирургии. Во всех случаях отмечалось сохранение зрения у животных и восполнение стромы роговицы в зоне язвенного дефекта. Эпителизация трансплантата отмечалась к 11‒14 суткам, роговичный синдром купировался на 6‒8 день.
В одном случае (1 собака) отмечались очаговая пигментация и сохранение неоваскуляризации в области проведения хирургического вмешательства (рис. 6).
При проведении гистологического исследования у данного животного регистрировали восстановление толщины роговицы в области дефекта, очаги дезорганизации стромального коллагена в области крепления амниотической мембраны (рис. 7).
При гистологическом исследовании фрагмента роговицы в области проведения кератопластики с использованием амниотической мембраны отмечалось отсутствие выраженной воспалительной реакции, передний эпителий не утолщен, внутренняя поверхность роговицы покрыта слоем пигментных клеток (до 0,2 мм), присутствует васкуляризация роговицы. Очаги дезорганизации роговицы и отсутствие воспаления свидетельствуют о амниотической мембраны в области проведения прикреплении кератопластики и хорошей интеграции данного материала.
Выводы
Применение амниотической мембраны в качестве биотрансплантата при реконструктивно-восстановительных операциях по поводу глубоких язв роговицы является перспективным методом, позволяющим добиться хорошего косметического эффекта и сохранить зрение у животного. В ходе исследования 26 собак с язвами роговицы в 11,54% случаев проводили хирургическое лечение с применением амниотической мембраны. Во всех случаях использования данного материала удалось добиться полной эпителизации язвенного дефекта роговицы с сохранением слабовыраженного помутнения в зоне проведения хирургии, в трети случаев отмечались очаговая пигментация и сохранение неоваскуляризации в области проведенной кератопластики, во всех случаях зрение у животных было сохранено.
Амниотическая мембрана выполняет роль механического протектора, обладающего рядом достоинств: угнетение воспаления, ангиогенеза и фиброза в области хирургического вмешательства, предотвращение эпителиального апоптоза и, как следствие, ускорение эпителизации язвенного дефекта с восстановлением толщины роговицы.
Возможность длительного хранения и низкая иммуногенность также являются преимуществами данного материала и способствуют его широкому применению при хирургическом лечении глубоких язв роговицы.
Об авторах
Вадим Геннадьевич Шипилов, ветеринарный врач, соискатель кафедры болезней мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
miravet.vet@ya.ru https://orcid.org/0009-0008-2893-5955
Дарья Александровна Вильмис, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры болезней мелких домашних, лабораторных и экзотических животных; интерн кафедры ветеринарной интернатуры
vilmisda@mgupp.ru https://orcid.org/0009-0007-0921-627X
Российский биотехнологический университет (РОСБИОТЕХ), Волоколамское шоссе, 11, Москва, 125080, Россия
Донской государственный технический университет, пл. им. Гагарина, 1, Ростов-на-Дону, 344003, Россия
УДК: 619:617.713-089.843:636.7
DOI: 10.32634/0869-8155-2025-398-09-8-14
